可能最开始的时候是张兴教授把陆成交给了他让他来带陆成做实验的,但是可能最后陆成已经把好多操作都学完了,他都还没有开始教的机会。
这就没办法证明自己是真的很厉害的这个事实了,毕竟在临床上的时候,山原齐木自己就被挤下去过,这个事情他可是还没告诉任何人的。
当然还是觉得有那么一些丢人,想从另外一个层面找回点自信。
但是陆成也是华国人,他根本抢不过秦霜,然后呢,秦霜交给了他实验之后,就似乎开始显露了他那该死的实验天赋了。
山原齐木也只能最终接受了这个很‘残酷’事实,继续到当前的实验方案之中了。
其实山原齐木心里还有一个比较郁闷的问题就是,为啥我也是做WB,肯尼师兄也是做WB,陆成就不知道选我呢?
……
在开始和肯尼师兄学习实验之前,陆成心里默默地回忆了一遍自己理解的WB技术的全流程。
WB的全称叫Western Blot,也就是蛋白质印记。是用特异性抗体检测细胞内特异性蛋白质的重要方法之一。
蛋白质印迹则是把电泳分离的蛋白质转移到固定基质上,然后利用抗原抗体反应来检测特异性的蛋白分子的技术。
它可以分成以下几个部分。
第一个首先就是要得到蛋白质,蛋白质就在细胞内,将其彻底剪碎并且把细胞裂解开得到细胞内基质液,液体中,就含有了大量的蛋白质。
然后我们要筛选并且标记出我们需要的蛋白质,就好像是从无数的人海中挑选万中无一的最适合传承的人一样,需要进行筛选。
筛选目标蛋白的过程,就需要依靠电泳来实现了,
因为我们知道蛋白质在溶液中的时候,通过调节溶液的PH值,就可以调整蛋白质的带电状态,使其带正电荷或者负电荷。
如此一来,我们只需要提前查询到目标蛋白质的等电点的PH值,就可以轻易地将其调整成需要的带电状态,然后将这个PH值的所有带正电荷的蛋白质与带负电荷的蛋白质分离开。
因为假如目标蛋白带正电荷,那么它在电场中的运动方向必然是与电场方向一致的,而带负电荷的便正好与之相反。
这样才只是第一步的分离,
虽然这一步还有很多其他的蛋白质也可能带正电荷,与目标蛋白同方向移动,但是,在运动的过程中,因为蛋白质的带电电荷与质量的差异,就可以让不同质量和不同电荷的蛋白质,在时间的堆积之下,
产生移动距离的差异,从而使得几乎相同的蛋白质,移动的大概距离一致,产生一条蛋白带。
而这条蛋白带子,其实是透明的,而且还可能夹杂有其他的蛋白,
那么接下来就需要最后的关键一步了,那就是在带子上,接受特异性抗体的冲洗,将目标蛋白进行标记。
标记之后,会产生有色的条带。
这个时候,我们便可以通过目测蛋白条带的宽度和颜色的深度不一致,从而将不同实验组别内细胞内含有目标蛋白的蛋白质的总含量给计区别开。
颜色较深,且条带较为宽的,就含量越高,颜色浅,条带窄的自然含量就少了……
这样的测定,叫蛋白含量多少的定性测定。
与此同时,我们还可以对其进行定量测定,那就是,假如我们人为地通过放置不同浓度的蛋白质,然后在电泳中制作一条标准蛋白的曲线。
然后再拿我们目标蛋白电泳之后的蛋白带的宽度和浓度与标准蛋白曲线作对比,就可以定量实验组和对照组中目标蛋白的具体质量。
……
这个实验的目的,就是为了检测,在我们做实验的过程中,通过影响了相应的基因,是否会对最终的蛋白表达产生影响。
毕竟,几乎所有基因调控最终反映在细胞上的基本要素,都是蛋白质的改变。
比如说某一种酶的含量增加或减少,然后因为酶的减少导致下游产物的减少,来控制我们需要达到的正常细胞状态。
就像是在肿瘤细胞中一样,我们可以通过基因的改变,调控其对葡萄糖的摄取量和葡萄糖进入无氧糖酵解的量,从而限制肿瘤细胞的能量供应,
没了能量供应或是少了能量供应,肿瘤细胞就会自然死亡,至少它的扩散和分裂的速度会大大地降低。
或者,更狠的,还可以通过调控其溶酶体的增加,使得细胞自行裂解,从而是肿瘤细胞自行凋亡。
等等等等,可行的办法很多。
如果把一个病变细胞比作一只生病了的小猫,它不再可爱,它会伤害你养了的数十万只可爱的小猫。
那你肯定很想把它解决掉,而且你的目的很简单,你需要这个小猫死就行了,那么,可以让其死亡的方式其实很多很多,拿刀杀掉,拿农药给毒死,拿开水烫死、饿死等等。
你可以想很多很多种。
但是,如果再加上一个前提条件,这只小猫是站在了无数一万只,非常可爱,而且还和人类很亲善的猫群中站着,紧紧地挨着。
你不能够单独地用手去提它出来,你只能通过远程的手段,要将其杀死,你会如何选?
将其饿死?
那么其他可爱的小猫同样会被你饿死,成千上万,甚至数亿,甚至可能导致整个猫群都死亡。
拿刀砍死?你不知道它的具体位置,只知道大概的位置,而且还不确定它在不在那里,你就要误伤很多你喜欢的猫。
烫死?
毒死?
你不会这么想。
所以,你需要借助一种手段,来把它挑出来,单独把它拧死算了。
但是,如果这只病变的小猫,还感染了许许多多的猫,让它们都病变了,那你就不能够在其中找了啊,那得把你累死。所以你不会这么做。
你就需要找一种十分特别的办法将其杀死,最好还不要伤害那些你喜欢的猫。
……
这就是困难之处,难的不是它怎么死,而是要在它死的同时,别的猫,别的正常细胞,该怎么活。
这就难了。
因此,我们就需要去了解这些病变小猫的作息规律、它的运动状态,到底用什么诱饵,用什么样的毒药或是该怎么下刀把一群猫杀掉,才能够最小可能地把整个整体给救活。
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